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慢病毒包装

慢病毒包装试剂盒

文字:[大][中][小] 手机页面二维码 2019/3/27     浏览次数:    

产品简介
知恩生物慢病毒包装试剂盒为您的病毒包装进行一站式服务,让初学者也能快速包装优质的慢病毒(适用于HIV系统慢病毒)。试剂盒包含全套包装质粒、转染试剂、病毒感染增强剂及稳定细胞株构建所用的嘌呤霉素。适用于基因过表达和干扰慢病毒的包装,以及后续稳定细胞株的构建。

客户只需构建带有目的基因的过表达或干扰质粒,再将其和试剂盒中的包装质粒Lentiviral Mix按1:1混合,用ZNHi Transfection Reagent将混合后的质粒转染293T细胞,24h就能看到荧光,48h就能收毒,利用慢病毒浓缩液能快速浓缩纯化病毒,为后续的感染实验提供高纯度高滴度的病毒。

知恩生物腺相关病毒产品发表文章(影响因子10.658)DOI: https://doi.org/10.1016/j.pneurobio.2020.101790


产品信息
产品名称 产品编号 规格 储存 价格(元)
Lentiviral Packaging Kit 慢病毒包装试剂盒
ZNLP-001-20
20T 4℃/-20℃
3088.00
Lentiviral Packaging Kit 慢病毒包装试剂盒
ZNLP-001-40
40T 4℃/-20℃
5288.00

产品组分

组分编号 组分名称 储存 产品编号/规格
ZNLP-001-2020T
ZNLP-001-4040T
ZNLP-001-A
Lentiviral Mix
-20℃
240μl
480μl
ZNLP-001-B
ZNHi Transfection Reagent
-20℃
1.2 ml
2×1.2 ml
ZNLP-001-C
EGFP对照质粒(Amp+
-20℃
5μg
5μg
ZNLP-001-D
病毒感染增强剂(8mg/ml)
-20℃
100μl
100μl

运输与保存方法
冰袋运输。组分均于-20℃保存。

慢病毒包装所需其他材料(自行准备或选用本公司产品)
1)HEK 293T:慢病毒包装工具细胞(cat#ZNLP-002)

2)FBS:特级胎牛血清FBS(cat#ZNLP-003)

3)慢病毒浓缩液(5×):cat#ZNLP-004

4)嘌呤霉素(1mg/ml):cat#ZNLP-005


质粒准备
慢病毒骨架质粒构建与大提:构建含目的基因或shRNA的骨架质粒(HIV系统),并进行大提获得足够质量的无内毒素质粒,且所提质粒DNA 的A260/A280在1.8~2.0之间,浓度大于0.5μg/μl。

细胞状态:选择状态良好的293T细胞进行病毒包装,尽量选择低代数细胞。


实验流程
1)293T细胞准备:转染前一天,将已经状态良好的293T细胞以合适比例接种到10cm培养皿中,当细胞长到80%左右时准备转染;
2)转染:转染前视细胞状态和密度决定是否提前换液。取两个无酶无菌的1.5ml EP管,在A、B管中先都加入500μl Opti-MEM,然后再分别加入质粒和转染试剂,详细内容参考下表:

组分
体积
Opti-MEM(A管)
500μl
骨架质粒DNA+Lentiviral Mix(A管)
12μg+12μl(10μg)
Opti-MEM(B管)
500μl
ZNHi Transfection Reagent(B管)
60μl

将B管转染试剂混合液加到A管中,轻轻混匀后,室温放置15min~20min后,再将AB管混合液加到细胞中,置于CO2培养箱继续培养;
3)换液:转染过液后,小心弃掉细胞上清(注意收集上清后需要灭菌处理),然后加入10ml新鲜的培养基(培养基血清浓度按细胞密度来调整,一般建议1%-5%)继续培养;
4)病毒收集:换液36-48h后,吸取细胞上清液于50ml离心管,4℃保存,再重新加入10ml新鲜的培养基,24h后再收集一次细胞上清于第一次的离心管中;
5)病毒处理:4℃,4000rpm离心10min收集上清液,并用用0.45μm滤器过滤后转移到新的离心管中。对病毒进行分装保存,可以直接用于下游实验。如果对病毒的滴度及纯度有较高要求,可用本公司的慢病毒浓缩液(cat#ZNLP-004)对病毒原液进行浓缩与纯化。也可以使用超滤管超滤实现病毒的浓缩;
6)病毒浓缩:使用本公司的慢病毒浓缩液(cat#ZNLP-004)进行病毒的浓缩,按病毒原液的1/4体积加入病毒浓缩液,混匀后4℃过夜(每20~30min混合一次,共进行3-5次)。第二天,4℃,4000rpm,离心 20min,吸弃上清后静置管子1~2分钟,吸走残余液体,再加入适量的PBS或培养基溶解慢病毒沉淀;超滤选择100KD大小的超滤管,4000-6000rpm,4℃离心。

7)病毒分装与保存:将病毒原液或浓缩液按合适体积进行分装,再保存于-80℃。


注意事项

1、构建稳定细胞株时,可用病毒感染增强剂和嘌呤霉素(cat#ZNLP-005)对细胞进行感染和筛选。

2、为了您的健康,实验操作过程尽量在生物安全柜中完成,并做好个人防护,请穿实验服和带一次性手套。所有实验废弃物均需要进行灭菌处理。

3、小量病毒包装时,也可以使用小提质粒。转染时如无opti-MEM,可以用PBS、生理盐水或无血清DMEM代替。


慢病毒包装步骤流程图



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